「ジデオキシ法」の説明続きです。 さて、 未知のDNAの塩基配列を決定するために、その塩基配列に相補的な鎖の伸長反応を起こさせるため、実験系は4系列行う。 @DNAの素材である普通のdATP(デオキシアデノシン三リン酸)、dTTP、 dGTP,dCTPの他に、意図的にddATP(ジデオキシアデノシン三リン酸) を加える実験系 AdATP、dTTP,dGTP,dCTPの他に意図的にddTTPを加える実験系 BdATP,dTTP,dGTP,dCTPの他に意図的にddGTPを加える実験系 CdATP,dTTP,dGTP,dCTPの他に意図的にddCTPを加える実験系 この結果、各実験系では 「配列を調べたい鎖」の 「T」の位置に相当する長さのddAで止った長さの鎖【実験系@】 「A」の位置に相当する長さのddTで止った長さの鎖【実験系A】 「C]の位置に相当する長さのddGで止った長さの鎖【実験系B】 「G]の位置に相当する長さのddCで止った長さの鎖【実験系C】 ができます。 それぞれの系列のDNA断片を別々のレーンで電気泳動くすると、各長さの断片のバンドができ、それを順に調べていくと青で表記したように 「伸長した鎖」の配列が決定できます。 その相補的塩基を考えると求めたい鎖の塩基配列が決定できます。 (類似の方法で、A、AまたはG、C、CまたはTの4系列を調べるマクサムギルバート法という方法もあります) 昔はこのように4レーン電気泳動で分析してきたのですが、最近は各系列に蛍光色素をつけ、それを波長に違いで分析することにより、一系列の実験で塩基配列が決定できます。これがDNAシーケンサーでの分析方法です。 それぞれの系列のDNA断片を別々のレーンで電気泳動くすると、各長さの断片のバンドができ、それを順に調べていくと青で表記したように 「伸長した鎖」の配列が決定できます。 その相補的塩基を考えると求めたい鎖の塩基配列が決定できます。 (類似の方法で、A、AまたはG、C、CまたはTの4系列を調べるマクサムギルバート法という方法もあります) 昔はこのように4レーン電気泳動で分析してきたのですが、最近は各系列に蛍光色素をつけ、それを波長に違いで分析することにより、一系列の実験で塩基配列が決定できます。これがDNAシーケンサーでの分析方法です。 |